基因擴增實驗又稱PCR實驗，其特點是能將微量的DNA大幅增加，PCR是分子生物學研究和實驗的常規(guī)方法，廣泛應用于生物學各個領(lǐng)域，例如：艾滋病檢測、乙型肝炎、禽疫病、癌基因的檢測和診斷，DNA指紋、個體識別、親子鑒定及法醫(yī)物證，動、植物檢疫，動物及其衍生產(chǎn)品檢測，動物飼料、化妝品、食品衛(wèi)生檢測，轉(zhuǎn)基因作物與轉(zhuǎn)基因微生物檢測等。pcr實驗室有效避免在實驗過程中造成試劑、標本、擴增物以及操作人員的交叉污染,保證人員安全及實驗數(shù)據(jù)可靠。

一、PCR基因擴增實驗室必須擁有的條件：

1、必須在無菌無塵環(huán)境下進行操作；

2、檢測人員必須通過國家臨檢中心業(yè)務培訓并取得合格證書；

3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證；

4、檢測設備必須符合標準PCR熒光實驗室設置要求；

5、必須擁有標準的的PCR熒光實驗室；

二、PCR基因擴增實驗室建立辦法流程：

1、建立樣品準備區(qū)；

2、樣品準備和RNA-PCR RNA-PCR的額外步驟需要額外的樣品操作，這樣增加了樣品之間污染的機會。為了避免這一問題，反轉(zhuǎn)錄一步可以在樣品準備區(qū)進行。在RNA-PCR中應用UNG以防止污染的方法也有報道；

3、建立前PCR區(qū)；

4、PCR實驗室試劑的操作；

5、在前PCR區(qū)建立PCR混合物；

6、控制污染的方法；

7、后PCR區(qū)PCR完成以后，需要分析樣品并解釋數(shù)據(jù)，應該留出一個專門用于反應后處理樣品的地方；

三、PCR實驗室布局

要完成一組pcr實驗，通常需要經(jīng)過試劑配制、樣品處理、核酸擴增和產(chǎn)物分析4個實驗過程。這4個實驗過程的實驗用房應相鄰布置，組成一個獨立的pcr實驗區(qū)。標準的pcr實驗區(qū)包括:試劑準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增區(qū)、產(chǎn)物分析區(qū)、各區(qū)配套的緩沖區(qū)及公共走廊。

1.試劑準備區(qū)

該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于標本制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。

試劑準備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-80°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內(nèi)。

房間的面積宜控制在15㎡~20㎡。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對正壓狀態(tài)，以防止外界含核酸氣溶膠的空氣進入，造成污染。

2.標本制備區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為臨床標本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定RNA時cDNA的合成。標本制備區(qū)配備有2~8°C冰箱和-20°C冰箱，計算冷負荷時，需要將它們計算在內(nèi)。在標本制備區(qū)，還需要配備生物安全柜，用于進行提取核酸的操作。

為避免提取的核酸在柜內(nèi)反復循環(huán)，造成標本之間的交叉污染，出現(xiàn)假陽性結(jié)果，該區(qū)域配備的生物安全柜必須是B2型的。生物安全柜工作區(qū)垂直氣流全部來自實驗室，排風經(jīng)過高效過濾器過濾后直接排至室外，不允許回到安全柜和實驗室中。

根據(jù)經(jīng)驗，如果實驗室內(nèi)配備生物安全柜，每配備一臺，實驗室的面積增加10m2;標本制備區(qū)的面積宜在25㎡~30㎡之間。本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

3.擴增室

該區(qū)域主要進行的操作為DNA或cDNA擴增。此外，已制備的DNA模板和合成的cDNA(來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進 行。

在巢式PCR測定中，通常在第一輪擴增后必須打開反應管，因此巢式擴增有較高的污染危險性，第二次加樣必須在本區(qū)內(nèi)進行。

擴增室主要配備PCR實驗室的核心儀器PCR儀，在實驗室建造過程中，需要給PCR儀配備專門的UPS電源，以保證其正常工作。該區(qū)面積控制在15㎡~20㎡。

本區(qū)的壓力梯度要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。建議采用  5~10Pa壓差，在控制上比較容易實現(xiàn)。

4.產(chǎn)物分析區(qū)

該區(qū)域主要進行的操作為擴增片段的測定。

在室內(nèi)配備通風櫥，保證房間內(nèi)的相對負壓，空氣從室外流向室內(nèi)。該區(qū)面積控制在15㎡~20㎡。本區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，因此對本區(qū)的壓力梯度的要求為:相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免擴增產(chǎn)物從本區(qū)擴散至其它區(qū)域。建議采用5~10Pa壓差，在控制上比較容易實現(xiàn)。

5.正負壓區(qū)域緩沖室的設置

根據(jù)壓力梯度的要求，試劑配制室和樣品處理室為相對正壓，擴增室和產(chǎn)物分析室為相對負壓，要求正壓的區(qū)域和要求負壓的區(qū)域的緩沖室內(nèi)的壓力設計大不相同

四、PCR實驗室裝修裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。注意事項：

1、幾個區(qū)域的大小設置情況，試劑準備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應大一些。

2、試劑準備區(qū)、樣品制備區(qū)設緊急洗眼器，以保證操作人員的安全。

3、PCR實驗室沒有嚴格的凈化要求，可以根據(jù)用戶的使用情況和資金的投入選擇。

總之PCR基因擴增實驗室，從實驗室設計，實驗室規(guī)劃到實驗室建設都是技術(shù)含量比較高的系統(tǒng)工程，需要專業(yè)公司團隊開展，否則無法達到理想效果，中晶在PCR基因擴增實驗室有著豐富的實踐經(jīng)驗，如有需要建PC實驗室及了解相關(guān)，歡迎來電咨詢：13051005692（微信同號）